合成的单链在实验时又一个和模板结合的退火过程，在这个过程中会自动形成茎环结构，如果你的茎环结构设计合理的话我也在类似文献上看到过上游引物含有额外的碱基，上面有说明的，是为了调整Tm值上游引物不能全覆盖miRNA，5‘增加几个碱基后Tm值和下游引物相对应，可以再用软件检查，避免非特异性。上游引物不能全覆盖miRNA...